近日,南方木本油料产业创新联盟理事单位湖南省林业科学院、木本油料资源利用全国重点实验室李昌珠研究员团队联合中南林业科技大学科研团队,在国际期刊Industrial Crops & Products(中科院1区,影响因子6.4)发表题为“Structural and mechanistic characterization of a genomically discovered lipase SHSL for enhanced diacylglycerol enrichment in Camellia oleifera oil”的研究论文。中南林业科技大学食品科学与工程学院博士研究生吴伟、木本油料资源利用全国重点实验室陈韵竹助理研究员为共同第一作者;木本油料资源利用全国重点实验室陈景震研究员和李昌珠研究员、中南林业科技大学生命科学与技术学院刘强副教授为共同通讯作者。
油茶是我国重要的木本油料树种,油茶籽油富含油酸,其甘油酯以甘油三酯(TAG)为主。二酰甘油(DAG)在功能性油脂开发中具有应用潜力。利用脂肪酶调节油茶籽油中不同甘油酯组分的含量,是油茶籽油精深加工的重要研究方向。
研究团队以从油茶饼粕中分离的链霉菌Streptomyces sp. CL10为研究对象,通过全基因组分析获得12个脂肪酶候选基因,进一步筛选其中5个开展重组表达及活性测定,最终鉴定出脂肪酶SHSL,其重组酶活性为187.36 U/mL。该酶属于Ⅳ型激素敏感性脂肪酶家族,最适反应温度为45℃,最适pH为8.0,表现出碱性脂肪酶的催化特征。
液相色谱-质谱联用分析显示,SHSL处理后,油茶籽油检出甘油酯中的TAG含量由对照组的445.3 mg/g降至111.0 mg/g,DAG含量由66.8 mg/g升至110.7 mg/g,单酰甘油(MAG)维持在较低水平。进一步分析发现,富含油酸的TAG分子种明显减少,相应DAG分子种增加。

图1 SHSL处理前后油茶籽油甘油酯组成及主要分子种变化
围绕实验中观察到的甘油酯组成变化,团队选取三油酸甘油酯、二油酸甘油酯和单油酸甘油酯为代表底物,开展分子对接与120 ns分子动力学模拟。结果表明,三油酸甘油酯在SHSL催化沟槽内更容易形成有利的酯键取向,其待水解酯键与催化残基Ser150、氧阴离子穴区域具有更适宜的空间关系。不同底物的结合构象和动态特征,为TAG减少、DAG富集的实验现象提供了分子结构层面的解释。

图2 SHSL与三类甘油酯底物的复合物轨迹及自由能景观
该研究从油茶饼粕来源的微生物中发掘出具有油茶籽油改性潜力的脂肪酶资源,并结合油脂组成分析和分子模拟研究了其底物识别特征,为油茶籽油功能性甘油酯开发及相关生物催化剂研究提供了新的参考。
研究得到国家自然科学基金、国家重点研发计划、湖南省重点研发计划及木本油料资源利用全国重点实验室项目等支持。